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编号:12646948
菠萝叶酚体外HepG2细胞跨膜转运及其对糖脂分布的影响(2)
http://www.100md.com 2014年8月15日 中国中药杂志 2014年第16期
     1.6 糖脂转运和代谢相关因子mRNA表达 取HepG2细胞接种于24孔板内,使其密度达80%。24 h后,分别换入50%胎牛血清或5%葡萄糖的EMEM培养基造模。于给药后一定时间收取细胞培养液,PBS洗2遍后,加入Trizole提取RNA(每孔0.5 mL)。按照说明书进行操作,提取RNA,做RT,最终进行实时定量PCR检测。所测指标的引物经GenBank设计并检索比对。由上海生工生物技术公司合成引物。高脂负荷模型为50%胎牛血清DMEM造模,于给药后24 h收样。高糖负荷模型为5%葡萄糖DMEM,于给药后6 h收样。给药组为含BLP的高浓度糖脂培养基,其中BLP终浓度为100 mg·L-1。对照组为等体积生理盐水。观察指标主要选择糖脂转运及其代谢的相关因子:葡萄糖转运蛋白4(GLUT4),葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD),丙酮酸激酶(PyrKm),已糖激酶(HEXK),低密度脂蛋白受体(LDLR),脂蛋白脂酶(LPL),肝甘油三酯脂酶(HTGL)。GLUT4(GenBank:M91463.1):F 5′-GGGGATTCGTGCAGCAAAGG-3′ ......
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