活血止痛凝胶体外释放和经皮渗透性研究(1)
[摘要] 采用Franz扩散池进行实验，以半透膜和小鼠皮肤为透过屏障，采用HPLC测定接受液[PEG400-95%乙醇-水(1∶3∶6)]中丹皮酚的含量，考察活血止痛凝胶体外释放和经皮渗透规律。结果显示，活血止痛凝胶中丹皮酚的释药规律符合Weibull方程，拟合方程为ln[-1/(1-Q)]=-0.790 5lnt-1.701 2(r=0.980 9)，在8 h内丹皮酚的累积释放率为85.18%，释放速率为2.827 μg·cm-2·h-1;丹皮酚的累积经皮渗透率以零级模型拟合好，拟合方程为Q(t)=1.757 9t+0.721 3(r=0.999 1)，给药8 h后丹皮酚的累积经皮渗透率为54.85%，渗透速率为1.820 μg·cm-2·h-1。研究结果表明，活血止痛凝胶具有良好的释放透皮性能。
[关键词] 释放; 透皮; 丹皮酚; HPLC; 活血止痛凝胶
[收稿日期] 2014-06-24
, 百拇医药
[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09301306-009)
[通信作者] 刘淑芝，研究员，博士生导师，主要从事中药新剂型与新药开发研究，Tel(010)84043227，E-mail：liushuzhi2004@sina.com
[作者简介] 于娟，硕士研究生，E-mail：juanmaozi@163.com
活血止痛凝胶由白芷、牡丹皮、天南星、冰片等组成，有活血止痛、疏通经络的作用。外用凝胶剂作为新型的外用制剂，由于具有良好的生物相容性，易于涂抹，局部给药后易于吸收、不污染衣物、稳定性好。此外，凝胶基质多为亲水性高分子材料，有利于皮肤水合形成，促进药物的吸收，所以成为近年来外用制剂研究热点。本实验以方中君药牡丹皮中丹皮酚为指标，采用不同模型对体外释药曲线与经皮给药数据进行拟合，考察活血止痛凝胶的体外释放与经皮渗透规律。
, 百拇医药
1 材料
高效液相色谱仪(2487型双波长紫外检测器，717型自动进样器，美国Waters)，BSA224S CW型电子分析天平(德国赛多利斯公司)，TK-20B型Franz扩散池(上海锴凯有限公司)，透析袋(截留相对分子质量7 000，北京经科宏达生物技术有限公司)。
活血止痛凝胶(自制，批号13111)，丹皮酚(中国食品药品检定研究院，批号110708-200506)，聚乙二醇(PEG，国药集团化学试剂有限公司)，甲醇为色谱纯，水为哇哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 方法学考察
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量，置10 mL量瓶中，加甲醇配成0.646 g·L-1的溶液，即得。精密移取上述对照品溶液0.1 mL，置于100 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，配成0.646 mg·L-1的对照品溶液备用。
, http://www.100md.com
2.1.2 供试品溶液的制备 取体外释放(透皮)接收液，过0.22 μm微孔滤膜，弃去初滤液，取续滤液，进样量10 μL。
2.1.3 色谱条件与系统适应性考察 高效液相色谱仪(2487型双波长紫外检测器，717型自动进样器，美国Waters)，Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相甲醇-0.1%磷酸水溶液(50∶50);流速1.0 mL·min-1，柱温35 ℃，检测波长274 nm，理论塔板数为4 334，分离度2.38。色谱图见图1。
2.1.4 标准曲线的制备 取丹皮酚对照品溶液1，2，5，10，15，20，25 μL进样，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=5 679.4X-1 245.6，R2=0.999 9(n=7)，线性范围 0.646～16.15 ng。
, 百拇医药
2.1.5 日内精密度 精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定丹皮酚峰面积，RSD 1.5%，表明仪器精密度良好。
2.1.6 日间精密度 精密吸取对照品溶液10 μL，于3日内每日分别进样3次，测定丹皮酚峰面积，RSD 1.0%，表明仪器的精密度良好。
2.1.7 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，6，8，10，12，16，24，36，48 h进样，测定丹皮酚峰面积，结果RSD 1.5%，表明供试品溶液在48 h稳定。
2.1.8 重复性试验 精密吸取6份供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，测定丹皮酚含量，其RSD 0.63%，表明方法的重复性良好。
2.1.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的释放接收液1 mL，按照质量比1∶1的比例加入丹皮酚对照品，按2.2.3项下色谱条件进行测定，进行加样回收试验，结果丹皮酚的平均加样回收率为100.7%，RSD 2.6%，表明方法的准确度良好，结果见表1。
2.2 活血止痛凝胶的制备
按基质处方比例称取卡波姆适量，于蒸馏水中溶胀过夜，搅拌均匀后加入三乙醇胺，使pH调为7，得卡波姆基质;另取处方量聚乙烯醇(PVA)于蒸馏水中加热至90 ℃，搅拌使其充分溶解，将一定量羟丙甲纤维素(HPMC)分散于加热的PVA液中，冷却，搅拌，溶解。最后将HPMC与PVA的混合液与卡波姆基质混合均匀，最后加入处方量中药浸膏，搅拌均匀制得活血止痛凝胶。, 百拇医药(于娟 杜茂波 刘淑芝 宋立华 沈硕 刘道芳)
[关键词] 释放; 透皮; 丹皮酚; HPLC; 活血止痛凝胶
[收稿日期] 2014-06-24
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[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项(2014ZX09301306-009)
[通信作者] 刘淑芝，研究员，博士生导师，主要从事中药新剂型与新药开发研究，Tel(010)84043227，E-mail：liushuzhi2004@sina.com
[作者简介] 于娟，硕士研究生，E-mail：juanmaozi@163.com
活血止痛凝胶由白芷、牡丹皮、天南星、冰片等组成，有活血止痛、疏通经络的作用。外用凝胶剂作为新型的外用制剂，由于具有良好的生物相容性，易于涂抹，局部给药后易于吸收、不污染衣物、稳定性好。此外，凝胶基质多为亲水性高分子材料，有利于皮肤水合形成，促进药物的吸收，所以成为近年来外用制剂研究热点。本实验以方中君药牡丹皮中丹皮酚为指标，采用不同模型对体外释药曲线与经皮给药数据进行拟合，考察活血止痛凝胶的体外释放与经皮渗透规律。
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1 材料
高效液相色谱仪(2487型双波长紫外检测器，717型自动进样器，美国Waters)，BSA224S CW型电子分析天平(德国赛多利斯公司)，TK-20B型Franz扩散池(上海锴凯有限公司)，透析袋(截留相对分子质量7 000，北京经科宏达生物技术有限公司)。
活血止痛凝胶(自制，批号13111)，丹皮酚(中国食品药品检定研究院，批号110708-200506)，聚乙二醇(PEG，国药集团化学试剂有限公司)，甲醇为色谱纯，水为哇哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 方法学考察
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量，置10 mL量瓶中，加甲醇配成0.646 g·L-1的溶液，即得。精密移取上述对照品溶液0.1 mL，置于100 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，配成0.646 mg·L-1的对照品溶液备用。
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2.1.2 供试品溶液的制备 取体外释放(透皮)接收液，过0.22 μm微孔滤膜，弃去初滤液，取续滤液，进样量10 μL。
2.1.3 色谱条件与系统适应性考察 高效液相色谱仪(2487型双波长紫外检测器，717型自动进样器，美国Waters)，Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相甲醇-0.1%磷酸水溶液(50∶50);流速1.0 mL·min-1，柱温35 ℃，检测波长274 nm，理论塔板数为4 334，分离度2.38。色谱图见图1。
2.1.4 标准曲线的制备 取丹皮酚对照品溶液1，2，5，10，15，20，25 μL进样，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=5 679.4X-1 245.6，R2=0.999 9(n=7)，线性范围 0.646～16.15 ng。
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2.1.5 日内精密度 精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定丹皮酚峰面积，RSD 1.5%，表明仪器精密度良好。
2.1.6 日间精密度 精密吸取对照品溶液10 μL，于3日内每日分别进样3次，测定丹皮酚峰面积，RSD 1.0%，表明仪器的精密度良好。
2.1.7 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，6，8，10，12，16，24，36，48 h进样，测定丹皮酚峰面积，结果RSD 1.5%，表明供试品溶液在48 h稳定。
2.1.8 重复性试验 精密吸取6份供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，测定丹皮酚含量，其RSD 0.63%，表明方法的重复性良好。
2.1.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的释放接收液1 mL，按照质量比1∶1的比例加入丹皮酚对照品，按2.2.3项下色谱条件进行测定，进行加样回收试验，结果丹皮酚的平均加样回收率为100.7%，RSD 2.6%，表明方法的准确度良好，结果见表1。
2.2 活血止痛凝胶的制备
按基质处方比例称取卡波姆适量，于蒸馏水中溶胀过夜，搅拌均匀后加入三乙醇胺，使pH调为7，得卡波姆基质;另取处方量聚乙烯醇(PVA)于蒸馏水中加热至90 ℃，搅拌使其充分溶解，将一定量羟丙甲纤维素(HPMC)分散于加热的PVA液中，冷却，搅拌，溶解。最后将HPMC与PVA的混合液与卡波姆基质混合均匀，最后加入处方量中药浸膏，搅拌均匀制得活血止痛凝胶。, 百拇医药(于娟 杜茂波 刘淑芝 宋立华 沈硕 刘道芳)