小儿支气管哮喘经治疗后血液CD4+CD25+调节性T细胞、白细胞介素—4和IFN—γ水平情况(1)
【摘要】 目的：观察布地奈德雾化吸入对支气管哮喘患儿外周血调节性T细胞细胞的比例和血清细胞因子白细胞介素-4、IFN-γ水平的影响。方法：选取笔者所在医院收治的40例哮喘患儿随机分成对照组和试验组(布地奈德雾化吸入组)，流式细胞仪检测治疗前后外周血单个核细胞(PBMCs)中调节性T细胞的比例，ELISA方法检测治疗前后血清中细胞因子白细胞介素-4，IFN-γ水平。结果：经治疗后，两组患者血清白细胞介素-4浓度水平明显减少(P<0.05)；IFN-γ水平和调节性T细胞细胞的比例显著增加，试验组的变化更为明显 (P<0.05)。结论：布地奈德可有效治疗儿童哮喘，其机制可能与促进调节性T细胞的产生，调节Th1/Th2平衡有关。
【关键词】 硫酸镁； 布地奈德； 雾化吸入； 哮喘； CD4+CD25+； 调节性T细胞； 白细胞介素-4； IFN-γ
中图分类号 R562.2 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2014)34-0025-03
, 百拇医药
小儿支气管哮喘是在临床中小儿疾病中常见的，同时也是高发的一类呼吸道疾病，其主要发病特点为小儿出现反复发作性咳嗽、喘鸣及呼吸困难，同时会伴有气道高反应性的可逆性或者梗阻性呼吸道一类疾病。在我国小儿支气管哮喘的发病率为1%～2%，而在经长期跟踪调查发现，小儿支气管哮喘出现逐年递增的发展[1]。在临床中发现，小儿支气管哮喘的发病因素有很多，如刺激物、感染、气候变化、药物、过敏源等，而呼吸道感染引发的小儿支气管哮喘占总病因的95%，其发病过程和Th2 优势应答及 Th1/Th2 比例密切相关[2]。布地奈德雾化吸入治疗哮喘已广泛应用，但其机制还有待进一步研究。本研究通过观察布地奈德雾化吸入对哮喘患者CD4+CD25+调节性T细胞及细胞因子的影响，进一步探讨布地奈德治疗哮喘机制。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2012年1月-2013年1月笔者所在医院治疗的1～5岁哮喘患儿40例，均符合2003年中华医学会呼吸病学分会哮喘防治指南的诊断标准[5]，随机分为试验组(布地奈德治疗组)20例和对照组20例。按照GINA标准试验组，轻度8例，中度4例，重度8例；对照组轻度7例，中度5例，重度8例。两组年龄、病程和病情比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。试验前1个月未使用糖皮质激素，无合并免疫性疾病。
, 百拇医药
1.2 治疗方法
1.2.1 对照组 对照组患儿均采用相同的常规治疗方法，如抗感染、解痉、平喘、化痰等对症常规处理，药物用量根据患儿的体重、哮喘严重程度进行配置。
1.2.2 试验组 试验组在对照组的基础上运用富利凯医疗用品(东莞)有限公司生产的一次性使用医用口含型雾化器 。加面罩进行给药，氧气流量为5～8 L/min，药物为0.5 ml吸入用布地奈德混悬液(普米克令舒)+0.25～0.5 ml硫酸沙丁胺醇雾化溶液(万托林)+0.9%氯化钠溶液2 ml，10 min/次，2～3次/d，疗程为3～5 d。一个月后改为1 mg/次，1次/d，再连续用药2个月后复查。
1.3 主要试剂与仪器
人淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品有限公司，人FITC标记的CD4+McAb、PE标记的CD25+McAb购自美国BD公司，白细胞介素-4和IFN-γ的ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司[3]，布地奈德及喷雾器购自Astra Zeneca Pty Ltd，CHESTHI-801型肺功能仪购自日本捷斯特公司，流式细胞仪购自美国BD公司，酶标仪购自Tecan Sunrise。
, http://www.100md.com
1.4 观察指标
1.4.1 流式细胞仪检测调节性T细胞的比例 取患者抗凝血3 ml，用人淋巴细胞分离液分离出PBMCs，PBS洗涤2次后计数，调整浓度1×107个细胞/ml。每管取1×106个细胞，加入FITC标记的CD4+McAb和PE标记的CD25+McAb，4 ℃孵育30 min，PBS洗3次，用200 μl PBS液重悬细胞，上流式细胞仪检测。
1.4.2 细胞因子检测 取患者全血3 ml，离心取血清，严格按照白细胞介素-4和IFN-γ的ELISA试剂说明操作，最后酶标仪检测OD值[4]。
1.5 统计学处理
采用SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，比较采用t检验；计数资料以率(%)表示，比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
, 百拇医药
2 结果
两组患者治疗前PBMCs中调节性T细胞比例及血清中白细胞介素-4和IFN-γ水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后调节性T细胞比例和血清IFN-γ水平较治疗前有显著增加，血清中白细胞介素-4水平显著减少，但试验组治疗的变化较对照组更大，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。
3 讨论
支气管哮喘是全球一种常见的慢性疾病，严重影响着患者的生活。它的主要特征为气道高反应与气道变应性反应，因可逆气流受限，诱发胸闷、气急、咳嗽、喘息等症状。常发作于清晨与夜间，部分患者能够自行缓解，也有部分患者可经治疗缓解症状。不过这类疾病复发率较高，严重情况下，会导致其出现呼吸衰竭、肺心病、肺气肿等症状。
哮喘(即支气管哮喘)作为临床上一种常见气道慢性炎症性疾病，主要由T淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等多种细胞参与引起[4]，在儿童人群中比较常见，特别是1～6岁的小儿，主要表现为呼吸困难、反复喘息及胸闷等。小儿哮喘发病原因多且复杂，不仅与支气管相关疾病有关，而且还易受到风寒、运动、居住环境、气候变化等影响[5]，上述因素会加重患者气道炎症，促进平滑肌痉挛进一步收缩，从而引发反复喘息等哮喘症状。目前临床上小儿哮喘常采取平喘、止咳、化痰、糖皮质药物等基础治疗。随着医疗技术的不断发展和进步，雾化吸入因其安全、高效、直接作用病变部位等优点逐渐成为小儿哮喘治疗的主要手段。当下雾化吸入治疗方式较多，如空气压缩泵雾化吸入、氧驱动雾化吸入等。空气压缩泵雾化吸入可以有效治疗支气管及肺部组织炎症，解除支气管痉挛状态，但它吸入时噪声较大，且雾化气体有一定的冲力及刺激，会影响到患儿的情绪，配合度下降，影响治疗效果。氧驱动雾化吸入可以直接让雾化药物作用于病变部位，从而有效清除支气管炎症，解除痉挛，同时还具有平喘、化痰的作用，比空气压缩泵雾化吸入效果更佳。另外它采取的是持续高浓度供氧形式，相比空气压缩泵雾化吸入更能快速、有效的缓解患者缺氧症状；同时它雾化吸入时噪声不是很大，刺激小，给患儿一种舒适感觉，且可耐受[6]。, 百拇医药(苏莉莉 章少丰)
【关键词】 硫酸镁； 布地奈德； 雾化吸入； 哮喘； CD4+CD25+； 调节性T细胞； 白细胞介素-4； IFN-γ
中图分类号 R562.2 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2014)34-0025-03
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小儿支气管哮喘是在临床中小儿疾病中常见的，同时也是高发的一类呼吸道疾病，其主要发病特点为小儿出现反复发作性咳嗽、喘鸣及呼吸困难，同时会伴有气道高反应性的可逆性或者梗阻性呼吸道一类疾病。在我国小儿支气管哮喘的发病率为1%～2%，而在经长期跟踪调查发现，小儿支气管哮喘出现逐年递增的发展[1]。在临床中发现，小儿支气管哮喘的发病因素有很多，如刺激物、感染、气候变化、药物、过敏源等，而呼吸道感染引发的小儿支气管哮喘占总病因的95%，其发病过程和Th2 优势应答及 Th1/Th2 比例密切相关[2]。布地奈德雾化吸入治疗哮喘已广泛应用，但其机制还有待进一步研究。本研究通过观察布地奈德雾化吸入对哮喘患者CD4+CD25+调节性T细胞及细胞因子的影响，进一步探讨布地奈德治疗哮喘机制。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2012年1月-2013年1月笔者所在医院治疗的1～5岁哮喘患儿40例，均符合2003年中华医学会呼吸病学分会哮喘防治指南的诊断标准[5]，随机分为试验组(布地奈德治疗组)20例和对照组20例。按照GINA标准试验组，轻度8例，中度4例，重度8例；对照组轻度7例，中度5例，重度8例。两组年龄、病程和病情比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。试验前1个月未使用糖皮质激素，无合并免疫性疾病。
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1.2 治疗方法
1.2.1 对照组 对照组患儿均采用相同的常规治疗方法，如抗感染、解痉、平喘、化痰等对症常规处理，药物用量根据患儿的体重、哮喘严重程度进行配置。
1.2.2 试验组 试验组在对照组的基础上运用富利凯医疗用品(东莞)有限公司生产的一次性使用医用口含型雾化器 。加面罩进行给药，氧气流量为5～8 L/min，药物为0.5 ml吸入用布地奈德混悬液(普米克令舒)+0.25～0.5 ml硫酸沙丁胺醇雾化溶液(万托林)+0.9%氯化钠溶液2 ml，10 min/次，2～3次/d，疗程为3～5 d。一个月后改为1 mg/次，1次/d，再连续用药2个月后复查。
1.3 主要试剂与仪器
人淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品有限公司，人FITC标记的CD4+McAb、PE标记的CD25+McAb购自美国BD公司，白细胞介素-4和IFN-γ的ELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司[3]，布地奈德及喷雾器购自Astra Zeneca Pty Ltd，CHESTHI-801型肺功能仪购自日本捷斯特公司，流式细胞仪购自美国BD公司，酶标仪购自Tecan Sunrise。
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1.4 观察指标
1.4.1 流式细胞仪检测调节性T细胞的比例 取患者抗凝血3 ml，用人淋巴细胞分离液分离出PBMCs，PBS洗涤2次后计数，调整浓度1×107个细胞/ml。每管取1×106个细胞，加入FITC标记的CD4+McAb和PE标记的CD25+McAb，4 ℃孵育30 min，PBS洗3次，用200 μl PBS液重悬细胞，上流式细胞仪检测。
1.4.2 细胞因子检测 取患者全血3 ml，离心取血清，严格按照白细胞介素-4和IFN-γ的ELISA试剂说明操作，最后酶标仪检测OD值[4]。
1.5 统计学处理
采用SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，比较采用t检验；计数资料以率(%)表示，比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。
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2 结果
两组患者治疗前PBMCs中调节性T细胞比例及血清中白细胞介素-4和IFN-γ水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)；治疗后调节性T细胞比例和血清IFN-γ水平较治疗前有显著增加，血清中白细胞介素-4水平显著减少，但试验组治疗的变化较对照组更大，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。
3 讨论
支气管哮喘是全球一种常见的慢性疾病，严重影响着患者的生活。它的主要特征为气道高反应与气道变应性反应，因可逆气流受限，诱发胸闷、气急、咳嗽、喘息等症状。常发作于清晨与夜间，部分患者能够自行缓解，也有部分患者可经治疗缓解症状。不过这类疾病复发率较高，严重情况下，会导致其出现呼吸衰竭、肺心病、肺气肿等症状。
哮喘(即支气管哮喘)作为临床上一种常见气道慢性炎症性疾病，主要由T淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等多种细胞参与引起[4]，在儿童人群中比较常见，特别是1～6岁的小儿，主要表现为呼吸困难、反复喘息及胸闷等。小儿哮喘发病原因多且复杂，不仅与支气管相关疾病有关，而且还易受到风寒、运动、居住环境、气候变化等影响[5]，上述因素会加重患者气道炎症，促进平滑肌痉挛进一步收缩，从而引发反复喘息等哮喘症状。目前临床上小儿哮喘常采取平喘、止咳、化痰、糖皮质药物等基础治疗。随着医疗技术的不断发展和进步，雾化吸入因其安全、高效、直接作用病变部位等优点逐渐成为小儿哮喘治疗的主要手段。当下雾化吸入治疗方式较多，如空气压缩泵雾化吸入、氧驱动雾化吸入等。空气压缩泵雾化吸入可以有效治疗支气管及肺部组织炎症，解除支气管痉挛状态，但它吸入时噪声较大，且雾化气体有一定的冲力及刺激，会影响到患儿的情绪，配合度下降，影响治疗效果。氧驱动雾化吸入可以直接让雾化药物作用于病变部位，从而有效清除支气管炎症，解除痉挛，同时还具有平喘、化痰的作用，比空气压缩泵雾化吸入效果更佳。另外它采取的是持续高浓度供氧形式，相比空气压缩泵雾化吸入更能快速、有效的缓解患者缺氧症状；同时它雾化吸入时噪声不是很大，刺激小，给患儿一种舒适感觉，且可耐受[6]。, 百拇医药(苏莉莉 章少丰)
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